新冠病毒灭活试验方法

新冠病毒灭活试验原理，是用细胞感染法测定消毒因子作用前后（或对照组与实验组）样本中病毒的量。以细胞病变作为判断指标，确定各组病毒的感染滴度，观察消毒因子对新型冠状病毒的灭活效果。咨询电话: 13816144967 (微信同号)

1、悬液法病毒灭活试验

a) 取待测消毒剂，用灭菌硬水稀释至所需浓度的 1.25 倍，于 20 ℃±1 ℃水浴中备用。

b) 病毒悬液的制备：取出-80 ℃低温保存的新型冠状病毒，室温解冻后，与有机干扰物按照 1:1 比例混合作为消毒剂灭活试验用病毒悬液。

c) 消毒试验：取上述病毒悬液1份加入4份待检消毒剂，立即混匀并记时。作用至规定时间，立即取出 0.1 mL，加入经鉴定合格的 0.9 mL 中和剂中混匀；或用经鉴定合格的除药方法处理。

d) 对照组试验：阳性对照组为病毒对照组，观察病毒生长是否良好，病毒滴度是否达到试验要求；阴性对照组用细胞维持液作为阴性对照，观察有无污染，细胞生长是否良好。

e) 以上各组按照终点稀释法分别进行病毒滴度测定。试验重复 3 次。咨询电话: 13816144967 (微信同号)

f) 终点稀释法：用细胞维持液对待滴定样本做 10 倍系列稀释，吸取样液 100 μL，接种于单层细胞培养板上，每个滴度接种 4 孔。在 36 ℃±1 ℃放置 1 h～2 h 后，取出培养板，更换细胞维持液。继续放入二氧化碳培养箱中（36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳）培养 3-4 天，显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞病变情况。

2、载体法病毒灭活试验

a) 取待测消毒剂，置于 20 ℃±1 ℃水浴中备用。

b) 病毒载体的制备：取灭菌载体片，滴染新型冠状病毒晾干备用。

c) 消毒试验：取病毒载体置于消毒因子，作用至规定的时间后取出放入经鉴定合格的中和剂或洗脱液 1.0 mL 中，作用 10 min,混匀洗脱。消毒器械载体布点应置于最难杀灭部位，具体方法参照《消毒技术规范》。

d) 对照组试验：阳性对照组为病毒对照组，观察病毒生长是否良好，病毒滴度是否达到试验要求；阴性对照组用细胞维持液作为阴性对照，观察有无污染，细胞生长是否良好。

e) 以上各组按照终点稀释法分别进行病毒滴度测定。试验重复 3 次。

f) 终点稀释法：用细胞维持液对待滴定样本做 10 倍系列稀释，吸取样液 100 μL，接种于单层细胞培养板上，每个滴度接种 4 孔。在 36 ℃±1 ℃放置 1 h～2 h 后，取出培养板，更换细胞维持液。继续二氧化碳培养箱中（36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳）培养 3-4 天，显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞病变情况。

新冠病毒灭活试验：结果评价

同时符合下列a)和b)的消毒因子判为消毒效果合格：

a) 去除残留消毒剂效果的中和剂鉴定试验合格；

b) 悬液灭活试验，每次试验对新型冠状病毒应有效灭活，阳性对照组病毒滴度对数值应≥5.0或载体灭活试验，每次试验对新型冠状病毒应有效灭活，阳性对照组病毒滴度对数值应≥4.0。咨询电话: 13816144967 (微信同号)