甲型流感病毒H1N1灭活检测
流感病毒分为甲、乙、丙、丁4型,人流感主要是甲型流感病毒和乙型流感病毒引起。甲流全名为甲型H1N1流感,是由甲型H1N1流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。人群对甲型H1N1流感病毒普遍易感,并可以人传染人。甲型流感每年呈季节性流行,易引起大流行。咨询电话:13816144967(微信同号)
临床标本的采集
采集对象:所有甲型流感( H1N1)疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测猪进行H1N1病毒的相关检测
采集种类:鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本,可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液(VTM),并立即用冰块或冰排保存或置于4 °C (冰箱),并马上运送至实验室
采集器材要求
拭子:应使用头部为合成纤维的拭子(例如,聚酯纤维),用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液
采样管:外螺旋口、耐一70°C冻存;
采样液:含有蛋白质稳定剂, 阻止细菌和真菌生长的抗生素,缓冲液(可使用Hank's或Eagle's等培养液加入抗菌素和0.5%BSA)
标准的储存和运输
临床标本储存
所有呼吸道标本应保存在4°C,并尽快放置在-70°C。如果没有-70°C度冰箱,标本应保存在4°C,但不应超过4天
临床标本运输
应按照A类包装 要求进行样品的包装,所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输咨询电话:13816144967(微信同号)
检测方法
1、首选Real-time RT-PCR方法检测
2、快速流感抗原检测
3、免疫荧光法
4、病毒分离
• 甲型流感病毒的快速抗原检测可以用于检测该猪流感病毒,但由于和其它检测方法相比灵敏度较低,因此可能会导致假阴性结果。
• 由于免疫荧光和其他免疫检测方法中使用的抗体可能不会和该病毒的靶位点结合,因此会产生假阴性结果。
• 虽然在PCR方法中检测流感基因的高度保守片段和确诊A型流感的引物也许还可以使用,但目前PCR诊断试验中用于甲型流感病毒分型的引物可能不能检测非人类病毒。
• 确诊猪流感病毒A/H1N1的唯一可靠的方法是进行病毒分离(病毒分离应在BSL-3实验室进行),并且至少进行部分基因测序。但阴性结果不能排除猪源流感病毒( A/H1N1)感染
1、流感快诊检测
区别甲、乙型流感病毒,乙型阳性排除,全部阴性结果不能排除
2、RT-PCR检测
针对猪源甲型流感病毒的特异性引物,人源甲型流感病毒弓|物不能有效地诊断猪源病毒感染
3、病毒分离
使用MDCK细胞、鸡胚可有效分离猪源病毒,对目前不能鉴定的甲型流感病毒株必须上送鉴定,在进行基因测序后可确定猪源病毒感染咨询电话:13816144967(微信同号)
检测实验室生物安全防护要求
生物安全防护原则
标本的检测、储存、包装和运送应按照《病原微生物室生物安全管理条例》( 国务院424号令)和《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》(中华人民共和国卫生部第45号令)等有关规定执行
采集疑似感染A(H1N1)型猪流感病毒的患者临床标本、进行标本处理、包装、诊断性检测及进行病毒分离的工作人员必须进行严格的安全防护
所有的涉及病例标本的实验操作(包括样本的处理、包装及包装拆除)必须在生物安全柜内进行;临床标本的实验活动(病毒分离除外)必须在BSL-2实验室内进行病毒分离、鉴定必须在BSL-3或更高一级的实验室内进行
实验室废弃物处理原则
应遵循所在机构标准实验室操作规程内的所有废弃物处置程序进行121 °C、 30分钟高压灭菌处理(注意:外排式高压灭菌器存在生物安全隐患)
化学消毒剂浸泡
有效的实验室使用的化学消毒剂
70%酒精
5%来苏尔
10%漂白液
所有人员在工作期间均应进行自我症状监测,一旦出现包括发热、咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛症状,应立即报告。
如有人员在无防护情况下暴露于采集自A (H1N1)型猪流感确诊病例的临床物质或活病毒,应考虑在暴露后的7天时间里进行抗病毒化学药物预防。咨询电话:13816144967(微信同号)